Megazyme試劑盒的操作步驟介紹

　　Megazyme試劑盒將目標(biāo)抗體包被于微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入微生物化的目標(biāo)抗體，將未結(jié)合的生物素抗體洗凈后，加入標(biāo)記和親和素，在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色，顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)，用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度，計算樣品濃度。

　　該試劑盒經(jīng)過改進后，更加快速和靈敏，靈敏度是傳統(tǒng)己糖激酶法的兩倍，成本低，試劑配制后可穩(wěn)定保存2年， 采用試劑盒形式，包含檢測必需的所有酶，提供計算軟件，使數(shù)據(jù)處理更方便，包含標(biāo)準(zhǔn)品。原理上，將單位體積的谷物面粉提取物或發(fā)酵肉湯培養(yǎng)基在條件下用底物混合物孵育，通過加入弱堿性溶液終止反應(yīng)并使溶液變色，測定400nm下的吸光度值，該值與樣品中α-淀粉酶的含量直接相關(guān)。         

　　Megazyme試劑盒操作步驟

　　①從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　②設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

　　③樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

　　④除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

　　⑤棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次。